|
بیوشیمی ۳ واحدی یاسمن تاجیک قوي ترين روش جداسازي پروتئين كروماتوگرافي ستوني است كه جداسازي در آن بر اساس بار اندازه ميل تركيبي و خواص ديگر ميباشد.ماده جامد منفذدار با ويژگي هاي شيميايي مناسب (فاز ثابت) درون يك ستون قرار داده شده و محلول بافري (فاز متحرك) از بين ان عبور ميكند.محلول داراي پروتئين در بالاي ستون قرار داده ميشود و بعد از بين اجزا ماتريكس جامد (مثل يك باند در حال گسترده شدن در فاز مايع بزرگتر)عبور ميكند.بر اساس ويژگي هاي آنها بعضي پروتئين ها سريع تر و بعضي ديگر به آهستگي از ستون عبور ميكند. كروماتوگرافي تعويض يوني از اختلافات موجود در علائم و قدرت بارهاي الكتريكي خالص پروتئين ها در PH معين استفاده ميكند.ماتريكس ستوني يك پليمر مصنوعي است كه به آن گروه هاي باردار اضافه شده است.اگر گروه انيوني متصل شده باشد به آن تعويض كننده آنيوني و اگر گروه كاتيوني متصل باشد به آن تعويض كننده كاتيوني گويند. ميل تركيبي هر پروتئين براي گروههاي باردار ستون به وسيله ) PHتعيين كننده حالت يوني مولكولي) و غلظت يوني نمك ازاد رقابت كننده با ان تحت تاثير قرار ميگيرد.با تغير دادن تدريجي PH يا غلظت نمك فاز متحرك براي فراهم كردن شيب PH يا شيب نمك. جداسازي را مي توان به حد مطلوب رساند. به عنوان مثال در كروماتوگرافي تعويضي كاتيوني ماتريكس جامد داراي گروههايي با بار منفي مي باشد. در فاز متحرك پروتئين هايي كه بار خالص مثبت دارند نسبت به آنهايي كه بار خالص منفي دارند آهسته تر از بين ماتريكس عبور مي كنند زيرا برهم كنش هاي بين اين مولكول ها با فاز ثابت جلوي مهاجرت آنها را مي گيرد. در ستون تعويض يوني گسترش باند پروتئيني در فاز متحرك (محلول پروتئين) در اثر تفكيك پروتئين ها با ويژگي هاي مختلف و گسترش انتشاري آنها مي باشد. هرچه قدر طول ستون كروماتوگرافي افزايش پيدا كند تفكيك دو نوع پروتئين مختلف داراي بارهاي خالص مختلف بهتر انجام مي گيرند. به هر حال سرعت جريان محلول پروتئين با افزايش طول ستون كروماتوگرافي كاهش مي يابد. وقتي مدت زمان عبور از ستون افزايش پيدا كند به علت گسترش انتشاري در هر باند پروتئين تفكيك نيز كاهش پيدا مي كند. زمانيكه محلول پروتئيني از ستون خارج شد قسمتهاي متوالي (جزء ها) اين محلول برون ريز در لوله هاي آزمايش جمع آوري مي شود. در كروماتوگرافي صافي كه ژل فيلتراسيون ناميده مي شودپروتئين ها بر اساس اندازه شان جدا مي شود. در اين روش پروتئين هاي بزرگ نسبت به پروتئين هاي كوچكتر با سرعت بيشتري از ستون عبور مي كنند كه كمي متضاد به نظر مي رسد. فاز جامد از دانه هاي پليمري داراي اتصال متقاطع با منافذ مهندسي شده با اندازه ويژه ساخته شده است.پروتئين هاي بزرگ نمي توانند وارد اين منافذ شوند و در مدت زمان كوتاهي سريعا از ميان دانه هاي ستون خارج مي شوند. پروتئين هاي كوچك وارد منافذ مي شوند و از ميان رزين هاي درون ستون به آهستگي عبور مي كنند. كروماتوگرافي ميل تركيبي بر اساس ميل تركيبي پروتئين مي باشد.دانه هاي داخل ستون داراي گروه هاي شيميايي با اتصال كووالان است كه به آنها ليگاند مي گويند.گروه يا مولكولي كه به ماكرو مولكولي مانند پروتئين متصل شود ليگاند نام دارد. زماني كه مخلوط پروتئين به ستون اضافه مي شود هر پروتئيني با تمايل به ليگاند خود به اين دانه ها متصل شده و مهاجرت آن در طول ماتريكس ستون به تاخير مي افتد.
+ نوشته شده در جمعه ۶ دی ۱۳۹۲ساعت 19:19 توسط سيد مصطفي محمدزاده
|
|
|
